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熒光檢測濾光片

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熒光濾光片是應用于生物醫(yī)學和生命科學儀器的關鍵元件,主要作用是在生物醫(yī)學熒光檢驗分析系統(tǒng)中分離和選擇物質的激發(fā)光與發(fā)射熒光的特征波段光譜。

熒光濾光片的典型特征是截止深度深,自發(fā)熒光小,而且要求透射面形好,利于熒光成像的提取。所以較好的熒光濾光片采用單片無色透明的玻璃作為基底,在玻璃的兩個表面鍍膜。相比常規(guī)的用多片膠合或顏色玻璃輔助截止的熒光濾光片,單片式在熒光成像上有明顯優(yōu)勢,但由于單片式的熒光濾光片的制作難度很高,所以成本較高。

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物體發(fā)什么顏色的光是因為它吸收了其它顏色的光而反射該顏色的光,如FITC能吸收可見光譜中的藍色光,而發(fā)射黃綠色熒光。熒光的強度遠弱于激發(fā)光,波長要長于激發(fā)光,這一點大家都知道。激發(fā)濾光片的作用是除去波長與熒光光譜段相同的那部分激發(fā)光,即激發(fā)光中長波段。發(fā)射濾光片/接收濾光片:從熒光中除去短波部分激發(fā)光(注意,仍是針對激發(fā)光)。

所以,熒光設備應是如此工作,激發(fā)光源發(fā)射出激發(fā)光,到達激發(fā)濾光片后被除去與發(fā)射熒光重合部分的長波段,然后到達熒光團,發(fā)射長波熒光,再到達發(fā)射濾光片,被除去低于此熒光波長的短波激發(fā)光,得到波段狹窄的熒光,從而不受強度遠大于熒光本身的激發(fā)光干擾。

濾光片如標有cut-in 515,則表示515以上的波段能通過,依此類推。而透析袋是cut-off 5KDa,表示5000以上分子量不能通過。但濾光片并不能精確截止某個波段的光,而只是一個正態(tài)分布高斯峰的最高點。

截止型濾光片:通過長于某個特定波長的濾光片,如只能通過大于700nm的激發(fā)光。

帶通濾光片:通過某個特定波長范圍內的濾光片,如700-800nm。

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